◆ 非洲豬瘟ASF的由來(lái)：

    非洲豬瘟(African suwinefever,ASF)是由非洲豬瘟病毒感染家豬和野豬后產(chǎn)生的一種烈性傳染病。此次疫情來(lái)勢(shì)迅猛，從2018年8月首次傳入我國(guó)后便飛速席卷養(yǎng)豬業(yè)，帶來(lái)了不可預(yù)估的經(jīng)濟(jì)損失。非洲瘟病毒是一種具有囊膜結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA病毒，感染家豬和野豬后引起高熱出血和死亡。目前PCR方法被指定用于非洲豬瘟病毒的檢測(cè)，其具有高靈敏度、高特異性、快速的特點(diǎn)。

    在此，通過(guò)實(shí)際的案例，與大家分享合作公司組合的高效靠譜的非洲豬瘟病毒檢測(cè)方案。

　◆ 非洲豬瘟感染組織樣本的前處理：

    非洲豬瘟的易感對(duì)象是家豬、野豬，通常采集的樣本為血漿和組織。對(duì)于組織樣本來(lái)說(shuō)，在核酸提取前需要進(jìn)行充分研磨破碎，保證核酸充分釋放，提取核酸后用于后續(xù)檢測(cè)，若無(wú)充分研磨可能會(huì)造成核酸檢測(cè)的假陰性結(jié)果。使用DHFSTPRP系列全自動(dòng)樣品快速研磨機(jī)，升級(jí)了更強(qiáng)的動(dòng)力，改進(jìn)了研磨方式，樣本在全封閉狀態(tài)下裂解避免樣品間的交叉污染以及外界污染，在保證樣本安全的前提下使樣品研磨更充分、徹底，研磨效果穩(wěn)定；有多種規(guī)格適配器、研磨珠和研磨罐，可同時(shí)快速處理24-64個(gè)組織樣本，液晶顯示屏可儲(chǔ)存10條數(shù)據(jù)。更有DHFSTPRP-II系列液氮冷凍研磨機(jī)，真正的全自動(dòng)冷凍研磨，低溫達(dá)到-196℃，可輕松處理熱敏感性樣本及難研磨樣本。

◆ 非洲豬瘟感染組織樣本核酸提取：

    TGuide S32自動(dòng)核酸提取儀采用最新磁棒吸附轉(zhuǎn)移核酸純化方式，利用96深孔反應(yīng)板，搭配不同種類(lèi)的磁珠法核酸提取試劑，同時(shí)操作1-32個(gè)樣本，從血液、細(xì)胞、組織、病毒等多種樣本中自動(dòng)分離提取純化核酸。

    儀器通過(guò)特制的磁棒高效吸附、轉(zhuǎn)移和釋放磁珠，磁珠回收效率：≥98%，核酸得率更高；液體處理體積：20-1000μl，多檔可調(diào)振動(dòng)速度，溶液體積自適應(yīng)振動(dòng)幅度，振動(dòng)幅度根據(jù)溶液體積自動(dòng)調(diào)整保證裂解效果；配備交叉污染控制系統(tǒng)與紫外滅菌模塊，有效避免孔間及板間交叉污染；同時(shí)優(yōu)化加熱槽位設(shè)計(jì)，核酸回收體積更為準(zhǔn)確。

◆ 高敏及高特異性的熒光定量PCR檢測(cè)：

    儀器通過(guò)特制的磁棒高效吸附、轉(zhuǎn)移和釋放磁珠，磁珠回收效率：≥98%，核酸得率更高；液體處理體積：20-1000μl，多檔可調(diào)振動(dòng)速度，溶液體積自適應(yīng)振動(dòng)幅度，振動(dòng)幅度根據(jù)溶液體積自動(dòng)調(diào)整保證裂解效果；配備交叉污染控制系統(tǒng)與紫外滅菌模塊，有效避免孔間及板間交叉污染；同時(shí)優(yōu)化加熱槽位設(shè)計(jì)，核酸回收體積更為準(zhǔn)確。

    終點(diǎn)法PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR均可以檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，從而推斷初始模板的含量。由于凝膠成像方法本身靈敏度的局限，實(shí)時(shí)熒光定量PCR熒光染料的加入，使儀器對(duì)于整個(gè)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，準(zhǔn)確性更高。

    寧波中道非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒（B盒）是一款基于熒光探針的熒光定量檢測(cè)試劑盒，主要用于檢測(cè)疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV，African Swine Fever Virus）核酸，適用于非洲豬瘟病毒的檢測(cè)、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

    試劑盒-20°進(jìn)行保存，有限期為12個(gè)月，盒內(nèi)提供陰性及陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)于整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。在第一批非洲豬瘟現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)試劑評(píng)價(jià)結(jié)果中，鄭州中道非洲豬瘟熒光定量PCR快速檢測(cè)試劑盒在診斷敏感性和診斷特異性上均表現(xiàn)優(yōu)異。

◆ 熒光定量檢測(cè)儀器：羅氏全能熒光定量PCR儀：

    羅氏Light Cycler 96熒光定量PCR儀是全波長(zhǎng)，高光強(qiáng)的PCR儀，高性價(jià)比，超長(zhǎng)使用壽命，所有樣本同時(shí)檢測(cè)且高重復(fù)性，采用業(yè)內(nèi)獨(dú)有的光纖導(dǎo)光，避免光信號(hào)的損失；運(yùn)用LightCycler 480上受好評(píng)的銀質(zhì)溫控模塊，導(dǎo)熱性快速均一，孔間溫控差異±0.2°，升溫速度4.4°/s，降溫速度2.2°/s，96孔檢測(cè)≤40min（35 Cyclers），較許多機(jī)型可節(jié)省一半的時(shí)間。Light Cycler 96可靈敏檢測(cè)單拷貝基因，拷貝數(shù)差異≤1.5倍，置信度≥99.8%，且無(wú)需無(wú)需ROX等被動(dòng)染料校正，方便快捷性能穩(wěn)定。

◆ 小體系上樣操作工具：eppendorf移液器：

小貼士：

    實(shí)時(shí)熒光定量PCR通常為小體系實(shí)驗(yàn)，對(duì)于微量樣本來(lái)說(shuō)特別是1-10ul上樣操作會(huì)出險(xiǎn)移液吹打不凈現(xiàn)象，精準(zhǔn)移液是準(zhǔn)確結(jié)果的重要要素，因此推薦使用Eppendorf Reference2系列移液器搭配原裝進(jìn)口吸頭進(jìn)行移液操作和聯(lián)系昆騰戰(zhàn)隊(duì)工程師做移液操作專場(chǎng)講座，為結(jié)果的準(zhǔn)確性保駕護(hù)航。

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